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【直发】精编分子生物学实验指南 （第五版）
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书名：精编分子生物学实验指南 第五版作者：美奥斯伯布伦特金斯顿
编者：美奥斯伯
正：副书名：精编分子生物学实验指南 第五版是否是套装：否
出版社名称：科学出版社页数页
是否套装：否
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编分子生物学实验指南 （第五版）
曾用
出版社科学出版社
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开本
著编译者 （美） 奥斯伯 等 主编 金由辛 等译校 美奥斯伯
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内容介绍
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译者序
前言
第章 大肠杆菌、质粒和噬菌体
培养基的制备及细菌学工具
限培养基
丰富培养基
固体培养基
实验工具
在液体培养基中培养
基本方案 过夜培养
基本方案 大体积培养
基本方案 利用计数 监测生长情况
基本方案 利用分光光度计监测生长情况
固体培养基上培养
基本方案 通过连续稀释法滴定和分离细菌菌落
基本方案 通过 板划线法分离单菌落
基本方案 通过铺 板分离单个菌落
基本方案 影印 板
辅助方案菌株的 存和复苏
细菌遗传学选论
质粒载体
质粒载体的选择
质粒 的小量制备
基本方案 碱裂解小量制备
备选方案 孔微量滴定板碱裂解法
基本方案 煮沸小量制备法
质粒 的大量制备
基本方案 碱裂解法制备粗制裂解物
基本方案 氯化铯溴化乙锭 衡离 法
备择方案利用 离子交换层析或分子筛层析 化质粒
将质粒 导人细菌细胞
基本方案 转化法
备择方案 步法制备和转化感受态细菌
基本方案 高放率的电转化方法
噬菌体概述
裂解性生长
溶源性生长
作为克隆载体的噬菌体
用噬菌体的 点
选择 入的
噬菌体来源的克隆载体的图谱
噬菌体铺 板产生噬斑
基本方案 通过连续稀释法分离单个噬斑
基本方案 噬菌体转染和体外 装构建
培养 衍生的噬菌体载体
基本方案通过 板裂解制备噬菌体库
备择方案制备液体裂解物
从噬菌体裂解液中制备
基本方案 通过分级 衡梯度离 制备
源于丝状噬菌体的载体
利用 噬菌体衍生载体制备单链
基本方案 利用辅助噬菌体从质粒制备单链
第章 的制备和分析
电泳及其应用
凝股和电路
水溶液中 的 化和浓缩
基本方案 的盼抽提和乙薛沉淀
备择方案 异丙醇沉淀
辅助方案 丁醇浓缩
辅助方案 酷抽提法去除残存醋、氯仿或丁醇
备择方案 硅膜离 柱法 化
备择方案 及 稀榕液的 化和浓缩
备择方案 乙酶沉淀法去除低分子质量的寡核背酸和核苷三磷酸
离子交换 谱法 化
基本方案
从哺乳动物组织中制备基因组
基本方案
从植物组织中制备基因组
基本方案氧化铠离 法制备植物
备择方案 制备植物
从细菌中制备基因组
基本方案细菌基因组 的小量制备
备择方案氧化铠法大规模制备细菌基因组
辅助方案从脚寻到的 制备物中除去多糖
琼脂糖凝胶电泳
基本方案 片段在标准琼脂糖凝股上的分离
辅助方案微型凝肢及中型凝肢
脉冲场凝肢电泳
基本方案倒转电场凝肢电泳
备择方案钳位均匀电场电掠（电泳）
辅助方案高分子质量 样品和分子质量标准物的制备
从琼脂糖凝胶中分离和 化大的 限制酶切片段
基本方案 琼脂糖凝肢电挽脱
基本方案 纸电泳
基本方案 低熔点琼脂糖凝肢分离
备择方案 琼脂糖酶消化法从低熔点琼脂糖凝腔中回收
备择方案 硅膜离 桂从低熔点琼脂糖凝腔中回收
辅助方案澳化乙键斑点定量法对 浓度进行快速估测
常规凝胶电泳分离小分子 片段
基本方案 非变性聚丙烯酷腔凝肢电旅
备择方案聚丙烯酷腊凝肢 小片段的电洗脱
基本方案 筛分型琼脂糖提肢电掠
的毛细管电泳
基本方案 寡核苷酸的分离
基本方案 定量 分析
备择方案基因型分析
印迹法
基本方案用高盐缓冲液在尼龙膜或硝酸纤维素膜上进行 印迹
辅助方案紫外透射仪的校准
备择方案 用破性缓冲液在尼龙膜上进行 印迹
备择方案 用向下毛细管转移法进行 印迹
备择方案 从聚丙烯酷脑凝肢 尼龙膜的电转印法
的斑点和狭线印迹
基本方案用多样抽滤加样器在不带电荷的尼龙膜和硝酸纤维素膜上进行斑点和狭线印迹
备择方案 用多样抽撞加样器在带正电荷的尼龙膜上进行 斑点和狭线印迹
备择方案 斑点印迹的手工制备
印迹的杂交分析
基本方案制才性标记的 探针对 印迹的杂交分析
备择方案用放射性标记的 探针对 印迹进行杂交分析
辅助方案从杂交膜上除去探针
寡核苷酸的合成及 化
关于核酸的化学合成洁的介绍
核酸合成方案
寡核苷酸 化方案
变性聚丙烯酷胶凝胶电泳 化寡核苷酸
基本方案
第章 和 的酶学 作
限制性内切核酸酶消化
基本方案单酶切消化单个 样品
备择方案 多限制性内切核酸酶消化
备择方案 消化多个 样品
备择方案 限制性内切核酸酶对 分消化
辅助方案 的甲基化
核酸 作的常用试剂和放射性同位素
储液溶液
酶缓冲液
核苷兰磷酸
标记核酸的放射性同位素
基本方案酸沉淀法测定 和 中的放射性
备择方案柱离 法从未掺人的前体 分离放射性标记
依赖的 聚合酶
基本方案 缺口翻译标记
基本方案 的端标记
基本方案 修复凸出的或端以产生 端
基本方案 随机寡核苷酸寻物介导的 标记
天然 噬菌体 聚合酶
经修饰的 噬菌体 聚合酶
聚合酶
不依赖于模板的 聚合酶
末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶）
依赖 的 聚合酶
逆转录酶
依艘 的 聚合酶
噬菌体的 聚合酶：、 和
磷酸酶和激酶
细菌碱性磷酸酶（） 和小牛肠碱性磷酸酶（）
噬菌体多核苷酸激酶
外切核酸酶
外切核酸酶 （ ）
噬菌体外切核酸酶（）
噬菌体基因 外切核酸酶
外切核酸酶 （ ）
内切核酸酶
核酸酶
核酸酶
绿豆核酸酶
微球菌核酸酶
脱氧核糖核酸酶 （ 酶）
无 酶活性的 酶
核糖核酸酶
核糖核酸酶 （ 酶）
元 酶的 酶
肌 核糖核酸酶 （ 酶
核糖核酸酶
连接酶
幢菌体 连接酶
大肠杆菌 连接酶
连接酶
连接酶
片段的亚克隆
基本方案 片段的亚克隆
备择方案提肢块中 片段的连接
聚合酶链反应构建重组
基本方案 片段亚克隆
非同位素探针的标记和比 检测
基本方案 用切口 移法制备生物素酷化的探针
基本方案 用随机嘉核苦酸引物合成法制备生物素酷化探针
辅助方案生物章酷化探针的比 法检测
备择方案制备和检测地高辛标记的 探针
非同位素探针的化学发光检测
基本方案生物素标记探针的化学发光检测
备择方案地高辛标记探针的化学发光捡测
辅助方案紫外光源的标准化
第章 的制备和分析
异硫氨酸脏法制备总
基本方案从组织或培养细胞中 步法分离
备择方案 法 化从培养细胞中提取的
备择方案 化组织
酣 法制备植物
基本方案
制备细菌
基本方案 从革兰氏 性菌中分离高质量的
备择方案 革兰氏回性菌中快速分离
基本方案 从革兰民阳性菌分离
（） 的制备
基本方案
用单链 探针进行 的 核酸酶作图分析
基本方案用 模板进行 的 作图
备择方案 从现链质粒模板合成单链探针
备择方案 用寡核脊酸探针进行 的定量 分析
辅助方案 核酸酶 定量分析的控制（参数）
核酸酶 护试验
基本方案
辅助方案 模板 的制备
辅助方案 探针的胶提
引物延伸
基本方案
的 印迹和狭线杂交分析
基本方案甲隆琼脂糖凝肢电掠分离 的 杂交
备择方案 经乙工醒工甲基亚枫处理的变性 杂交
备择方案 经狭线印迹固定的未分级 样品的 杂交
辅助方案 印迹探针的除去
鉴定新转录的
基本方案在哺乳动物细胞中的核失控转录
备择方案 用杜恩斯匀浆器分离细胞核
备择方案 藤椅梯度离 分离细胞核
辅助方案制备用于核失控转录实验的硝酸纤维素膜
第章 重组 文库的构建
基因组 文库概述
代表性与随机性
亚基因组文库
基因组 文库载体
文库概述
噬菌体文库的扩增
基本方案
薪粒和质位文库的扩增
基本方案
第章 重组 文库的筛选
噬菌体文库的铺 板和转移
基本方案噬菌体文库的铺 板和转移
薪粒及质位文库的铺 板和转移
基本方案甜粒及质粒文库的铺 板和转移
应用 片段作探针
基本方案在甲酷腊榕液中杂交
备择方案在水禧液中杂交
使用合成寡核背酸作探针
基本方案在氯化铀拧楝酸铀溶液（） 中杂交
备择方案在氧化 甲镀（） 中杂交
辅助方案棍合寡核脊酸端标记
噬菌体克隆的 化
基本方案
黏粒和质粒克隆的 化
基本方案
在噬菌体噬斑中产生的融合蛋白的 疫筛选
基本方案用抗体筛选表达文库
备择方案在抗体筛选之前用 诱导融合蛋白表达
在杂交选择和翻译后进行的 疫筛选
基本方案
用单克隆抗体表达克隆
基本方案分离编码细胞表面抗原的 克隆
辅助方案 抗体 被乎板的制备
备择方案分离编码细胞内抗原的 克隆
辅助方案 制备聚偏二乙烯膜 裹的 板
基于重组方法（ ） 以筛选 噬菌体文库
基本方案
第章 序列测定
双脱氧（） 测序法
化学（曲 ）测序法
双脱氧法或化学测序法的选择
放射性标记测序反应的替代
其他测序技术的进展
计辞机分析
测序策略
双脱氧测序
化学测序
构建用于 测序的嵌套式缺失体
基本方案 用外切酶 构建单向缺失突变体
备选方案用 使 于外切酶渭化
基本方案 用 核酸酶构建嵌套式缺失突变体
制备 测序模板
基本方案 制备单链 噬菌体
基本方案 从小量裂解物中制备 噬菌体
基本方案 小量制备用于化学测序的重组 或 质粒
基本方案 小量制备用于双脱氧测序的双链质粒
基本方案 用于双脱氧测序的双链质粒或 噬菌体 的碱变性
基本方案 制备用于热循环测序质粒或噬菌体
双脱氧法 测序
基本方案 用测序酶（经修饰的 噬菌体 聚合酶）进行标记 止测序反应
备择方案 使用测序酶和 的标记 止测序反应
备择方案 使用 聚合酶进行 测序反应
备择方案 用端标记引物进行 步法测序反应
基本方案 用标己核苷酸进行热循环测序反应
备择方案 用端标记引物进行热循环测序反应
备择方案 使用荧光染料标记的引物和 止物进行循环测序
化学发光双脱氧 测序法
基本方案利用生物素标记引物的化学发光 测序法
备择方案 链霉 和素和生物素酷化碱性磷酸酶两步检测法（间接法）
各择方案 用半抗原标记引物进行测序并用抗体碱性磷酸酶偶联物检测
化学测序法
…………
辅助方案解剖针的
备择方案随机抱子分析
酵母菌基因组转座子的诱变
战略计划
基本方案利用诱变文库 得到酵母菌突变体
辅助方案 小载体聚合酶链反应
辅助方案 诱变基因产物的表位标记
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
基本方案 构建融合载体研究酵母菌基因调控
基本方案 半乳糖苷酶在被体培养基中的检测
备择方案利用滤纸提取检测法筛选表达β半乳糖苷酶的酵母菌落
将 导人酵母细胞
基本方案乙酸铿转化
备择方案电穿孔转化
辅助方案单链高分子质量载体 的制备
利用互补作用克隆酵母菌基因
基本方案
酵母细胞中质粒的加工
基本方案 从酵母细胞中分离质粒
基本方案 穿梭质粒
基本方案 定位突变质粒缺口修复技术和等位基因修复技术
克隆化酵母 的加工
基本方案 整合性转化
基因置换技术
基本方案 步整合置换产生修饰基因
备择方案 通过移换产生修饰基因
基本方案 通过铜诱导双重关闭技术产生条件等位基因
酵母 的制备
基本方案从酵母菌中快速分离质粒
备择方案酵母染 体 的快速分离
酵母菌 的制备
基本方案热酸性酣抽提法制备酵母
备择方案 玻璃珠制备
备择方案 （） 的制备
制备酵母蛋白抽提物
基本方案原生质球制备及裂解
辅助方案差速离 法制各细胞核
备择方案 玻璃珠破细胞法
备择方案 液氮破细胞法
第章 原位来交和 疫组织化学
组织、胚胎及单细胞的固定、 埋及切片
基本方案组织和胚胎的多聚甲醛固定及石蜡 埋
备择方案悬潭及培养细胞的 固定
辅助方案 成年小鼠的灌注
辅助方案 蜡块中样本的切片
辅助方案 被载玻片的制备
冰凉切片
基本方案样本制备及切片
辅助方案 用于原位杂交的冰冻切片的固定
辅助方案 组织固定和直在糖灌注
细胞 的原位杂交
基本方案细胞的石蜡切片杂交实验
备择方案冰冻切片的杂交
辅助方案 合成 标记的核糖核酸探针
辅助方案 标记的双链 探针的合成
杂交探针的检测
基本方案 胶片放射自显影
基本方案 乳胶放射自显影
辅助方案蝴才自显影用稀释享脏的制备
放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定
基本方案吉姆萨（） 染
备择方案 苏木 伊虹染
备择方案 甲苯胶蓝染
备择方案 染 法
疫组织化学法
基本方案 单层生长细胞的 疫荧光标记
备择方案 悬浮细胞的 疫荧光标记
基本方案 组织切片的 疫荧光标记
备择方案 链霉 和素生物素结合物 疫荧光标记
备择方案 组织切片的 疫金标记
备择方案 组织切片的 疫过氧化物酶标记
备择方案 组织切片的 疫荧光双标记法
用非同位素探针进行原位杂交和检测
基本方案荧光原位杂交
杂交信号的放大
非同位素标记探针的酶法检测
原位 和杂交检测低丰度的靶核酸
总体设计
基本方案 用 的原位逆转录进行 和 靶序列的 扩增
备择方案 步法逆转录及扩增
基本方案 扩增的靶产物的杂交和检测
辅助方案 浸泡处理载玻片的制备
辅助方案 在载玻片上制备原位 样本
辅助方案 用 标记寡核苦酸探针
在脊椎动物的胚胎和器官中的整体标本原位杂交和检测
基本方案 小鼠或者鸡的胚胎以及椿宫中的整体原位杂交
基本方案 小鼠胚、鸡胚或者器官中 杂交的酶学检测
备择方案 非洲爪瞻的整体原位杂交
备择方案 非洲爪瞻胚胎 杂交的酶学检测
辅助方案 地高辛标记的 探针的合成
辅助方案 用胚胎预吸收 片段
荧光显微镜的原理及使用
荧光分子探针
滤光器以及撞光设备
多频带的滤镜和多燃料荧光
光源
显微镜的物镜
图片分辨率和点散布函数（）
活细胞的荧光显微镜检术
兔疫标记 标记固定细胞和组织的 般步骤
共聚焦显微术基本原理
光分割的原理
共聚焦显微镜的类型
实际 作指南
原位杂交的测量
基本方案通过磷光核存储影像决定原位杂交中的时才性同位素标记的异摞双链体的分布
辅助方案制备参考体系
细胞凋 的形态：生化性质和流式细胞仪检测
基本方案 使用活体荧光染料的显微镜定量凋 指数和细胞活力
基本方案 用次 峰值计算细胞凋
基本方案 用 流式细胞定量凋 细胞
基本方案 通过 组织切西中的凋 细胞的原位杂交
冉半乳糖苷酶活性的整体封片 疫组化检测
基本方案半乳糖苦酶活性的整体封片染 和 疫组化检测
备择方案准备大组织的厚切片进行β半乳糖苷酶染
辅助方案 存和组织清洗
辅助方案 石蜡 埋、切片和染
第章 黯合酶链反应α）
扩增：标准程序和 化
基本方案 扩增：标准程序和 化
利用 产物直接进行 序列测定
基本方案 不对称 产生的单链产物的双脱氧测序
备择方案 单引物重复扩增制备单链模板以用于双脱氧测序
备择方案 制备用于双脱氧测序的双链 产物
备择方案 用噬菌体外切核酸酶消化双链 产物得到单链进行双脱氧测序
基本方案 用于化学测序的 产物的标记
备择方案 产物的基因组测序
用于基因组测序及足迹分析的连接介导
基本方案连接介导的单侧
辅助方案 从单层细胞制备用于 足迹分析的基因组
辅助方案 从悬浮细胞中制备用于 足迹分析的基因组
辅助方案 用于化学测序的基因组 的制备
产物的分子克隆
基本方案产生 凸出端
备择方案产生半位点
扩增 （）
基本方案在 适条件下进行 的 扩增
备择方案 避 长时间的共沉淀及复性步骤的方法
备择方案 将 直接用于扩增步骤
辅助方案粗制 的快速提取
利用单侧 （锚式） 进行 扩增
基本方案 扩增己知序列的下游（端）区段
基本方案 扩增己知序列上带（ 端）区段
通过 方法对微量 进行定量分析
基本方案
第章 蛋白质的表达
蛋白质在大肠杆菌中的表达概述
噬菌体 聚舍酶启动子表达系统
基本方案用双质粒系统进行表达
备择方案 质粒编码蛋白的选择性标记
备择方案 通过 噬菌体 感染的表达
融合蛋白载体表达概述
融合蛋白的酶解和化学裂解
基本方案 用 困子进行融合蛋白的酶解
辅助方案用 因子进行变性融合蛋白的裂解
备择方案 用凝血酶进行融合蛋白的酶解
备择方案 与分离介质结合的 融合蛋白的酶解
备择方案 用肠激酶进行融合蛋白的酶解
基本方案 用澳化氧对融合蛋白进行化学降解
备择方案 用提脏化学裂解融合蛋白
备择方案 低 水解融合蛋白进行化学裂解
谷脏甘肤转移酶融合蛋白的表达及 化
基本方案 谷脱甘肽转移酶融合蛋白的表达及 化
硫氧还蛋白融合蛋白的表达和 化
基本方案硫氧还蛋白融合蛋白的构建和表达
辅助方案 用弗氏细胞压碎器裂解大肠杆菌
辅助方案 硫氧还蛋白融合蛋白的渗透性释放
辅助方案 用热处理 化硫氧还蛋白
杆状病毒表达系统的概述
杆状病毒表达系统
昆虫细胞中蛋白质的翻译后修饰
用杆状病毒表达系统 量表达蛋白质的步骤
选择杆状病毒转移载体
昆虫细胞培养的 存及重组杆状病毒的产生
基本方案 昆虫细胞的 存和培养
基本方案 用线性化杆状病毒 共转染昆虫细胞
备择方案用野生型杆状病毒 共转染产生重组病毒
基本方案 杆状病毒储液的制备
基本方案 用噬斑试验测定病毒储液的滴皮
用杆状病毒系统表达和 化重组蛋白
基本方案 用于 初分析的小规模表达
辅助方案 蛋白质生产高峰期的确定
辅助方案 重组蛋白的代谢标记
基本方案 重组蛋白的大规模生产
基本方案 含有多聚组氨酸标签重组蛋白的 化
备择方案含有 标签重组蛋白的 化
概述：蛋白质在哺乳动物细胞中表达
病毒介导的基因转移
瞬时表达
用 细胞瞬时表达蛋白质
基本方案
症苗病毒表达系统概述
细胞系和症苗病毒储液的制备
基本方案 贴壁细胞的培养
基本方案 悬浮细胞的培养
基本方案 症苗病毒储液的制备
辅助方案 噬斑分析测定症苗病毒储液的滴度
基本方案 鸡胚成纤维细胞的制备
基本方案 病毒储液的制备
辅助方案 用 疫染 法滴定 病毒
重组症苗病毒的制备
基本方案 症苗载体转染（瘟苗病毒）感染的细胞
辅助方案 症苗病毒的 化
辅助方案 症苗病毒 的提取
基本方案 筛选重组病毒噬斑
基本方案 噬斑扩增
基本方案 重组 的活体 疫染
辅助方案 用刀豆蛋白 被组织培养板
重组症苗病毒及其产物的鉴定
基本方案 应用 方法检测症苗
基本方案 应用 杂交检测症苗病毒
基本方案 应用斑点杂交检测症苗病毒
备择方案应用点印迹检测表达的蛋自质
基本方案 应用 疫印迹检测表达蛋自
基本方案 应用 疫沉淀栓测表达蛋白
用症苗病毒 聚合酶系统表达基因
基本方案 重组症菌病毒（） 感染后的脂质体转染
基本方案 两种重组瘟苗病毒共感染细胞
基本方案 单病毒感染 细胞
基本方案 利用 系统进行基因表达
辅助方案脉冲标记检测表达的蛋白质
自主调节的 环素控制系统诱导基因表达
基本方案磷酸钙介导的 稳定转染 细胞和 环素调控的靶质粒
辅助方案分析目的基因的蛋白质表达
从哺乳动物细胞中表达和 化抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体
基本方案 从组成型表达 标记蛋白的克隆化细胞系中 化多亚基蛋白复合物
基本方案 从条件性表达 标记蛋白的克隆化细胞系中 化多亚基蛋白复合体
备择方案变化起始材料和挽脱条件 化抗原表位标记蛋自复合体的多种形式
辅助方案用 离子交换层析柱 化多种形式的抗原表位标记的蛋白复合体
第章 蛋白质磷酸化的分析
蛋白质磷酸化概述
目标记培养细胞和制备用于 疫沉淀的细胞裂解物
基本方案培养细胞的 标记和温和去垢剂裂解法
备择方案 煮沸法裂解细胞
磷酸氨基酸分析
基本方案磷酸氨基酸的酸水解和双向电旅分析
备择方案碱处理提高转移 滤膜上的含磷酸酶氨酸和磷酸苏氨酸的蛋白质的检测灵敏度
分析非标记蛋白质的磷酸化作用
基本方案 用抗磷酸醋氨酸抗体和标记蛋白 进行 疫印迹分析
备择方案用增强化学发光法（） 检测结合的抗体
基本方案 磷酸酶消化法鉴定磷酸化的蛋白质
酶法检测磷酸化作用
基本方案 用非 异酸性磷酸酶 化磷酸蛋白质
备择方案 用非 异碱性磷酸酶捕化磷酸蛋白质
基本方案 用丝氨酸苏氨酸蛋白磷酸酶消化磷酸蛋白质
备择方案 用酶氨酸磷酸酶消化磷酸蛋白质
辅助方案离解 的测量和鉴定
异性识别酷氨酸磷酸化肤的抗体的制备
基本方案 抗磷酸肤的多克隆抗体的制备
基本方案 抗磷酸肤的单克隆抗体的制备
辅助方案 肤的合成
辅助方案 将肤链交联到 和介质上
辅助方案 将磷酸酶氨酸交联到 和介质上
用外源性底物分析蛋白激酶
基本方案 环核苷酸依赖性蛋白激酶的分析
基本方案 蛋白 酶 异构体的分析
基本方案 用酶蛋白进行酷蛋白 酶的分析
备择方案用多肤底物进行酷蛋白激酶的分析
基本方案 钙调蛋白依赖性激酶的分析
基本方案 醋氨酸 酶的分析
基本方案 在凝肢中直接进行激酶的分析
辅助方案 用于激酶分析的细胞裂解方案
辅助方案 三氯乙酸沉淀法测定放射性物质的掺入率
辅助方案 磷酸纤维素膜的吸附
研究蛋白质磷酸化的渗透策略
基本方案用渗透细胞进行蛋白磷酸化的分析
备择方案 用于 的天然细胞样品制备
备择方案 制备用于等电聚焦的夭然细胞样品
磷酸肤图谱和磷酸化位点的鉴定
基本方案 用聚丙烯酷股凝肢分离的蛋白质的膜蛋白酶磷酸肤图谱
备择方案固相化蛋白质的水解消化
辅助方案 从纤维素 板上提取磷酸肤
基本方案 用于工 降解法测定肤中磷酸化氨基酸的位置
基本方案 第二次鉴别性捎化以检测磷酸肤中 定氨基酸的存在
辅助方案 用于微序列测定或质谱的磷酸肤的制备
第章 生物信息学
用 程序组进行序列相似性搜索
概述
搜索策略
第 章蛋白质相互作用的分析
利用相互作用阱双杂交系统鉴定相互作用蛋白
基本方案 鉴定诱饵蛋白
基本方案 相互作用蛋白的捕获
备择方案 相互作用阱的快速筛选
备择方案 通过相互作用交配进行捕获实验
辅助方案 用于 疫印迹分析的蛋白质提取物的制备
辅助方案 制备蛙 载体
与 融合蛋白结合的蛋白质的 和 化
基本方案 融合蛋自的 和 化
辅助方案提取物的制备
基于噬菌体表达克隆来确认相互作用蛋白质
基本方案相互作用克隆
表面等离子共振技术
基本方案 使用 芯片的表面等离子共振
基本方案 使用 芯片的表面等离子共振
用共沉淀法检测蛋白质 蛋白质之间的相互作用
基本方案用蛋白琼脂糖共沉淀蛋白
备择方案用 融合蛋白共沉淀
用 分析识别蛋白质相互作用
基本方案用 分析蛋白质混合物
备择方案 用 疫印迹技术检测相互作用蛋白质
备择方案 在 中用多肤检测 定的相互作用序列
第章 染 质的装配与分析
微球菌核酸酶分析染 质结构
基本方案 渗透化细胞的染 质的徽球菌核酸酶消化
基本方案 分离的细胞核的染 质的微球菌核酸酶消化
基本方案 化的基因组 的微球菌核酸酶消化
辅助方案 染 质消化得到的 的 化和鉴定
辅助方案 核酸酶切割图谱分析策略
辅助方案 使用 的 方法在核苷酸水 上检测 对双链的切割
分离乙酸尿素聚丙烯酷胶凝胶电泳分离组蛋白变体和翻译后修饰异构体
基本方案组蛋白的乙酸尿素聚丙烯酣睡凝肢电泳分析
辅助方案 凝肢板的组装
辅助方案 从制备的核中分离组蛋白
辅助方案 聚丙烯酣睡凝脏的电转移
用 疫共沉淀的方法从总细胞抽提物中确定与染 质结合的蛋白质
基本方案用 疫共沉淀的方法从细胞总抽提物中确定与染 质结合的蛋白质
从哺乳动物细胞中分离组蛋白和核小体核
基本方案 核的制备
基本方案 去 的寡聚刷、体的溶解和 化
基本方案 单聚及二聚核小体的 化
基本方案 握磷灰石层析法 化核 组蛋白
用盐透析的方法组装核小体模板
基本方案 用逐步盐透析的方法组装核小体模板
基本方案 用梯度盐透析的方法组装高浓度的单核小体
基本方案 用梯庭盐透析的方法组装核小体串
辅助方案 细菌的重组核 组蛋白的 化
辅助方案 用于单核小体组装的单链端标记的 的制备
辅助方案 用于组装高浓度非标记的单核小体的 的制备
辅助方案 用于核小体串组装的 的制备
辅助方案 用琼脂糖凝肢电掠分析重建复合体
辅助方案 用聚丙烯酿腊凝肢电泳分析重建复合体
辅助方案 通过 消化确定核小体串组装的革围
使用果蝇系统进行染 质重组
基本方案 果蝇 染 质重组抽提物的制备
基本方案 从果蝇胚胎中 化核 组蛋白
基本方案 用 抽提物进行染 质重组
基本方案 重组的果蝇 的表达和 化
基本方案 重组的果蝇 的表达和 化
备择方案 重组的果蝇 的表达和 化（ 树脂）
基本方案 使用重组的果蝇因子进行染 质装配
备择方案 重组染 质装配反应中的核 组蛋白与 比率的滴定
辅助方案果蝇拓扑异构酶 的核 催化区域的表达和 化
第章 核酸阵列
核酸阵列概述
微阵列擅长做什么？
核酸阵列还能够做什么？
关于数据分析
哪里有更多的信息？
用于表达分析的 的制备
策略安排
基本方案用于表达监测以及与寡核苦酸芯片杂交的 扩增
辅助方案 对照基因的体外转录和转录库的制备
备择方案 和体外转录产物的回相可逆固定（） 化
辅助方案 定量
用 阵列技术检测人的基因表达谱
基本方案 扩增和影印
基本方案 抽提和标记
基本方案 杂交和数据处理
辅助方案 的琼脂糖凝肢电泳
辅助方案 荧光法测定 浓度
辅助方案 多聚赖氨酸封闭玻片
第章 组合文库的建立和使用
构建组合库及文库所用的 库的设计、合成和扩增
基本方案 随机序列库的 化
辅助方案 库的复杂度的测定
辅助方案 库的偏好性的测定
辅助方案 库扩增的小规模 反应的 化
基本方案 库 的大规模扩增
肤适配体 用于细胞过程的正向及反向分析的显性遗传学试剂
基本方案 构建硫氧还蛋白肤适配体组合库
基本方案 利用双杂交系统相互作用阱筛选 定蛋白的肤适配体
基本方案 通过相互作用交配确定识别 异性
基本方案 肤适配体的 和力成熟
基本方案 用肤适配体正向分析细胞过程
辅助方案肤适配体靶点的鉴定
利用 显示法进行蛋白筛选
基本方案 制备和 化 显示蛋白
基本方案 显示蛋白的 化和逆转录
基本方案 显示蛋白的筛选与扩增
辅助方案 标签的 化
辅助方案 诱导突变
第章 单个细胞或 细胞间差异表达基因的发现和分析
差减 文库的建立
基本方案差减 文库的构建
基于 的差减 克隆
基本方案差躏 文库的构建
辅助方案狭锺斑点杂交监测差减过程
的 差异显示
基本方案 的 差异显示
限制性内切核酸酶介导的差异显示（）
基本方案 文库的准备和两轮扩增
备择方案两 段 扩增
辅助方案直接印迹电泳
基于 的转录表达谱分析
基本方案基于 的转录表达谱分析
基因表达系列分析（）
基本方案基因表达系列分析（）
辅助方案 验证 产物
辅助方案 化双标签的 扩增
附录 试剂和溶渡
附录 实用测量值和数据
附录 生物化学和分子生物学常用技术
附录 凝胶和印迹实验中放射性标记蛋白和 的检测及定量
附录 玻璃器皿的硅化
附录 透析与 滤
附录 用吸收光谱法和荧光光谱法定量 和
附录 通过沉默突变引人限制性内切核酸酶识别位点
附录 哺乳动物细胞组织培养技术
附录 使用放射性同位素
附录 分子生物学家的统计学：组比较
附录 试剂和设备的 商
附录 参考文献
索引
【直发】精编分子生物学实验指南 （第五版）
主题：无编号
书名：精编分子生物学实验指南 第五版作者：美奥斯伯布伦特金斯顿
编者：美奥斯伯
正：副书名：精编分子生物学实验指南 第五版是否是套装：否
出版社名称：科学出版社页数页
是否套装：否
商品参数
编分子生物学实验指南 （第五版）
曾用
出版社科学出版社
版次
出版时间年月
开本
著编译者 （美） 奥斯伯 等 主编 金由辛 等译校 美奥斯伯
页数
编码
内容介绍
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目录
目录
译者序
前言
第章 大肠杆菌、质粒和噬菌体
培养基的制备及细菌学工具
限培养基
丰富培养基
固体培养基
实验工具
在液体培养基中培养
基本方案 过夜培养
基本方案 大体积培养
基本方案 利用计数 监测生长情况
基本方案 利用分光光度计监测生长情况
固体培养基上培养
基本方案 通过连续稀释法滴定和分离细菌菌落
基本方案 通过 板划线法分离单菌落
基本方案 通过铺 板分离单个菌落
基本方案 影印 板
辅助方案菌株的 存和复苏
细菌遗传学选论
质粒载体
质粒载体的选择
质粒 的小量制备
基本方案 碱裂解小量制备
备选方案 孔微量滴定板碱裂解法
基本方案 煮沸小量制备法
质粒 的大量制备
基本方案 碱裂解法制备粗制裂解物
基本方案 氯化铯溴化乙锭 衡离 法
备择方案利用 离子交换层析或分子筛层析 化质粒
将质粒 导人细菌细胞
基本方案 转化法
备择方案 步法制备和转化感受态细菌
基本方案 高放率的电转化方法
噬菌体概述
裂解性生长
溶源性生长
作为克隆载体的噬菌体
用噬菌体的 点
选择 入的
噬菌体来源的克隆载体的图谱
噬菌体铺 板产生噬斑
基本方案 通过连续稀释法分离单个噬斑
基本方案 噬菌体转染和体外 装构建
培养 衍生的噬菌体载体
基本方案通过 板裂解制备噬菌体库
备择方案制备液体裂解物
从噬菌体裂解液中制备
基本方案 通过分级 衡梯度离 制备
源于丝状噬菌体的载体
利用 噬菌体衍生载体制备单链
基本方案 利用辅助噬菌体从质粒制备单链
第章 的制备和分析
电泳及其应用
凝股和电路
水溶液中 的 化和浓缩
基本方案 的盼抽提和乙薛沉淀
备择方案 异丙醇沉淀
辅助方案 丁醇浓缩
辅助方案 酷抽提法去除残存醋、氯仿或丁醇
备择方案 硅膜离 柱法 化
备择方案 及 稀榕液的 化和浓缩
备择方案 乙酶沉淀法去除低分子质量的寡核背酸和核苷三磷酸
离子交换 谱法 化
基本方案
从哺乳动物组织中制备基因组
基本方案
从植物组织中制备基因组
基本方案氧化铠离 法制备植物
备择方案 制备植物
从细菌中制备基因组
基本方案细菌基因组 的小量制备
备择方案氧化铠法大规模制备细菌基因组
辅助方案从脚寻到的 制备物中除去多糖
琼脂糖凝胶电泳
基本方案 片段在标准琼脂糖凝股上的分离
辅助方案微型凝肢及中型凝肢
脉冲场凝肢电泳
基本方案倒转电场凝肢电泳
备择方案钳位均匀电场电掠（电泳）
辅助方案高分子质量 样品和分子质量标准物的制备
从琼脂糖凝胶中分离和 化大的 限制酶切片段
基本方案 琼脂糖凝肢电挽脱
基本方案 纸电泳
基本方案 低熔点琼脂糖凝肢分离
备择方案 琼脂糖酶消化法从低熔点琼脂糖凝腔中回收
备择方案 硅膜离 桂从低熔点琼脂糖凝腔中回收
辅助方案澳化乙键斑点定量法对 浓度进行快速估测
常规凝胶电泳分离小分子 片段
基本方案 非变性聚丙烯酷腔凝肢电旅
备择方案聚丙烯酷腊凝肢 小片段的电洗脱
基本方案 筛分型琼脂糖提肢电掠
的毛细管电泳
基本方案 寡核苷酸的分离
基本方案 定量 分析
备择方案基因型分析
印迹法
基本方案用高盐缓冲液在尼龙膜或硝酸纤维素膜上进行 印迹
辅助方案紫外透射仪的校准
备择方案 用破性缓冲液在尼龙膜上进行 印迹
备择方案 用向下毛细管转移法进行 印迹
备择方案 从聚丙烯酷脑凝肢 尼龙膜的电转印法
的斑点和狭线印迹
基本方案用多样抽滤加样器在不带电荷的尼龙膜和硝酸纤维素膜上进行斑点和狭线印迹
备择方案 用多样抽撞加样器在带正电荷的尼龙膜上进行 斑点和狭线印迹
备择方案 斑点印迹的手工制备
印迹的杂交分析
基本方案制才性标记的 探针对 印迹的杂交分析
备择方案用放射性标记的 探针对 印迹进行杂交分析
辅助方案从杂交膜上除去探针
寡核苷酸的合成及 化
关于核酸的化学合成洁的介绍
核酸合成方案
寡核苷酸 化方案
变性聚丙烯酷胶凝胶电泳 化寡核苷酸
基本方案
第章 和 的酶学 作
限制性内切核酸酶消化
基本方案单酶切消化单个 样品
备择方案 多限制性内切核酸酶消化
备择方案 消化多个 样品
备择方案 限制性内切核酸酶对 分消化
辅助方案 的甲基化
核酸 作的常用试剂和放射性同位素
储液溶液
酶缓冲液
核苷兰磷酸
标记核酸的放射性同位素
基本方案酸沉淀法测定 和 中的放射性
备择方案柱离 法从未掺人的前体 分离放射性标记
依赖的 聚合酶
基本方案 缺口翻译标记
基本方案 的端标记
基本方案 修复凸出的或端以产生 端
基本方案 随机寡核苷酸寻物介导的 标记
天然 噬菌体 聚合酶
经修饰的 噬菌体 聚合酶
聚合酶
不依赖于模板的 聚合酶
末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶）
依赖 的 聚合酶
逆转录酶
依艘 的 聚合酶
噬菌体的 聚合酶：、 和
磷酸酶和激酶
细菌碱性磷酸酶（） 和小牛肠碱性磷酸酶（）
噬菌体多核苷酸激酶
外切核酸酶
外切核酸酶 （ ）
噬菌体外切核酸酶（）
噬菌体基因 外切核酸酶
外切核酸酶 （ ）
内切核酸酶
核酸酶
核酸酶
绿豆核酸酶
微球菌核酸酶
脱氧核糖核酸酶 （ 酶）
无 酶活性的 酶
核糖核酸酶
核糖核酸酶 （ 酶）
元 酶的 酶
肌 核糖核酸酶 （ 酶
核糖核酸酶
连接酶
幢菌体 连接酶
大肠杆菌 连接酶
连接酶
连接酶
片段的亚克隆
基本方案 片段的亚克隆
备择方案提肢块中 片段的连接
聚合酶链反应构建重组
基本方案 片段亚克隆
非同位素探针的标记和比 检测
基本方案 用切口 移法制备生物素酷化的探针
基本方案 用随机嘉核苦酸引物合成法制备生物素酷化探针
辅助方案生物章酷化探针的比 法检测
备择方案制备和检测地高辛标记的 探针
非同位素探针的化学发光检测
基本方案生物素标记探针的化学发光检测
备择方案地高辛标记探针的化学发光捡测
辅助方案紫外光源的标准化
第章 的制备和分析
异硫氨酸脏法制备总
基本方案从组织或培养细胞中 步法分离
备择方案 法 化从培养细胞中提取的
备择方案 化组织
酣 法制备植物
基本方案
制备细菌
基本方案 从革兰氏 性菌中分离高质量的
备择方案 革兰氏回性菌中快速分离
基本方案 从革兰民阳性菌分离
（） 的制备
基本方案
用单链 探针进行 的 核酸酶作图分析
基本方案用 模板进行 的 作图
备择方案 从现链质粒模板合成单链探针
备择方案 用寡核脊酸探针进行 的定量 分析
辅助方案 核酸酶 定量分析的控制（参数）
核酸酶 护试验
基本方案
辅助方案 模板 的制备
辅助方案 探针的胶提
引物延伸
基本方案
的 印迹和狭线杂交分析
基本方案甲隆琼脂糖凝肢电掠分离 的 杂交
备择方案 经乙工醒工甲基亚枫处理的变性 杂交
备择方案 经狭线印迹固定的未分级 样品的 杂交
辅助方案 印迹探针的除去
鉴定新转录的
基本方案在哺乳动物细胞中的核失控转录
备择方案 用杜恩斯匀浆器分离细胞核
备择方案 藤椅梯度离 分离细胞核
辅助方案制备用于核失控转录实验的硝酸纤维素膜
第章 重组 文库的构建
基因组 文库概述
代表性与随机性
亚基因组文库
基因组 文库载体
文库概述
噬菌体文库的扩增
基本方案
薪粒和质位文库的扩增
基本方案
第章 重组 文库的筛选
噬菌体文库的铺 板和转移
基本方案噬菌体文库的铺 板和转移
薪粒及质位文库的铺 板和转移
基本方案甜粒及质粒文库的铺 板和转移
应用 片段作探针
基本方案在甲酷腊榕液中杂交
备择方案在水禧液中杂交
使用合成寡核背酸作探针
基本方案在氯化铀拧楝酸铀溶液（） 中杂交
备择方案在氧化 甲镀（） 中杂交
辅助方案棍合寡核脊酸端标记
噬菌体克隆的 化
基本方案
黏粒和质粒克隆的 化
基本方案
在噬菌体噬斑中产生的融合蛋白的 疫筛选
基本方案用抗体筛选表达文库
备择方案在抗体筛选之前用 诱导融合蛋白表达
在杂交选择和翻译后进行的 疫筛选
基本方案
用单克隆抗体表达克隆
基本方案分离编码细胞表面抗原的 克隆
辅助方案 抗体 被乎板的制备
备择方案分离编码细胞内抗原的 克隆
辅助方案 制备聚偏二乙烯膜 裹的 板
基于重组方法（ ） 以筛选 噬菌体文库
基本方案
第章 序列测定
双脱氧（） 测序法
化学（曲 ）测序法
双脱氧法或化学测序法的选择
放射性标记测序反应的替代
其他测序技术的进展
计辞机分析
测序策略
双脱氧测序
化学测序
构建用于 测序的嵌套式缺失体
基本方案 用外切酶 构建单向缺失突变体
备选方案用 使 于外切酶渭化
基本方案 用 核酸酶构建嵌套式缺失突变体
制备 测序模板
基本方案 制备单链 噬菌体
基本方案 从小量裂解物中制备 噬菌体
基本方案 小量制备用于化学测序的重组 或 质粒
基本方案 小量制备用于双脱氧测序的双链质粒
基本方案 用于双脱氧测序的双链质粒或 噬菌体 的碱变性
基本方案 制备用于热循环测序质粒或噬菌体
双脱氧法 测序
基本方案 用测序酶（经修饰的 噬菌体 聚合酶）进行标记 止测序反应
备择方案 使用测序酶和 的标记 止测序反应
备择方案 使用 聚合酶进行 测序反应
备择方案 用端标记引物进行 步法测序反应
基本方案 用标己核苷酸进行热循环测序反应
备择方案 用端标记引物进行热循环测序反应
备择方案 使用荧光染料标记的引物和 止物进行循环测序
化学发光双脱氧 测序法
基本方案利用生物素标记引物的化学发光 测序法
备择方案 链霉 和素和生物素酷化碱性磷酸酶两步检测法（间接法）
各择方案 用半抗原标记引物进行测序并用抗体碱性磷酸酶偶联物检测
化学测序法
…………
辅助方案解剖针的
备择方案随机抱子分析
酵母菌基因组转座子的诱变
战略计划
基本方案利用诱变文库 得到酵母菌突变体
辅助方案 小载体聚合酶链反应
辅助方案 诱变基因产物的表位标记
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
基本方案 构建融合载体研究酵母菌基因调控
基本方案 半乳糖苷酶在被体培养基中的检测
备择方案利用滤纸提取检测法筛选表达β半乳糖苷酶的酵母菌落
将 导人酵母细胞
基本方案乙酸铿转化
备择方案电穿孔转化
辅助方案单链高分子质量载体 的制备
利用互补作用克隆酵母菌基因
基本方案
酵母细胞中质粒的加工
基本方案 从酵母细胞中分离质粒
基本方案 穿梭质粒
基本方案 定位突变质粒缺口修复技术和等位基因修复技术
克隆化酵母 的加工
基本方案 整合性转化
基因置换技术
基本方案 步整合置换产生修饰基因
备择方案 通过移换产生修饰基因
基本方案 通过铜诱导双重关闭技术产生条件等位基因
酵母 的制备
基本方案从酵母菌中快速分离质粒
备择方案酵母染 体 的快速分离
酵母菌 的制备
基本方案热酸性酣抽提法制备酵母
备择方案 玻璃珠制备
备择方案 （） 的制备
制备酵母蛋白抽提物
基本方案原生质球制备及裂解
辅助方案差速离 法制各细胞核
备择方案 玻璃珠破细胞法
备择方案 液氮破细胞法
第章 原位来交和 疫组织化学
组织、胚胎及单细胞的固定、 埋及切片
基本方案组织和胚胎的多聚甲醛固定及石蜡 埋
备择方案悬潭及培养细胞的 固定
辅助方案 成年小鼠的灌注
辅助方案 蜡块中样本的切片
辅助方案 被载玻片的制备
冰凉切片
基本方案样本制备及切片
辅助方案 用于原位杂交的冰冻切片的固定
辅助方案 组织固定和直在糖灌注
细胞 的原位杂交
基本方案细胞的石蜡切片杂交实验
备择方案冰冻切片的杂交
辅助方案 合成 标记的核糖核酸探针
辅助方案 标记的双链 探针的合成
杂交探针的检测
基本方案 胶片放射自显影
基本方案 乳胶放射自显影
辅助方案蝴才自显影用稀释享脏的制备
放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定
基本方案吉姆萨（） 染
备择方案 苏木 伊虹染
备择方案 甲苯胶蓝染
备择方案 染 法
疫组织化学法
基本方案 单层生长细胞的 疫荧光标记
备择方案 悬浮细胞的 疫荧光标记
基本方案 组织切片的 疫荧光标记
备择方案 链霉 和素生物素结合物 疫荧光标记
备择方案 组织切片的 疫金标记
备择方案 组织切片的 疫过氧化物酶标记
备择方案 组织切片的 疫荧光双标记法
用非同位素探针进行原位杂交和检测
基本方案荧光原位杂交
杂交信号的放大
非同位素标记探针的酶法检测
原位 和杂交检测低丰度的靶核酸
总体设计
基本方案 用 的原位逆转录进行 和 靶序列的 扩增
备择方案 步法逆转录及扩增
基本方案 扩增的靶产物的杂交和检测
辅助方案 浸泡处理载玻片的制备
辅助方案 在载玻片上制备原位 样本
辅助方案 用 标记寡核苦酸探针
在脊椎动物的胚胎和器官中的整体标本原位杂交和检测
基本方案 小鼠或者鸡的胚胎以及椿宫中的整体原位杂交
基本方案 小鼠胚、鸡胚或者器官中 杂交的酶学检测
备择方案 非洲爪瞻的整体原位杂交
备择方案 非洲爪瞻胚胎 杂交的酶学检测
辅助方案 地高辛标记的 探针的合成
辅助方案 用胚胎预吸收 片段
荧光显微镜的原理及使用
荧光分子探针
滤光器以及撞光设备
多频带的滤镜和多燃料荧光
光源
显微镜的物镜
图片分辨率和点散布函数（）
活细胞的荧光显微镜检术
兔疫标记 标记固定细胞和组织的 般步骤
共聚焦显微术基本原理
光分割的原理
共聚焦显微镜的类型
实际 作指南
原位杂交的测量
基本方案通过磷光核存储影像决定原位杂交中的时才性同位素标记的异摞双链体的分布
辅助方案制备参考体系
细胞凋 的形态：生化性质和流式细胞仪检测
基本方案 使用活体荧光染料的显微镜定量凋 指数和细胞活力
基本方案 用次 峰值计算细胞凋
基本方案 用 流式细胞定量凋 细胞
基本方案 通过 组织切西中的凋 细胞的原位杂交
冉半乳糖苷酶活性的整体封片 疫组化检测
基本方案半乳糖苦酶活性的整体封片染 和 疫组化检测
备择方案准备大组织的厚切片进行β半乳糖苷酶染
辅助方案 存和组织清洗
辅助方案 石蜡 埋、切片和染
第章 黯合酶链反应α）
扩增：标准程序和 化
基本方案 扩增：标准程序和 化
利用 产物直接进行 序列测定
基本方案 不对称 产生的单链产物的双脱氧测序
备择方案 单引物重复扩增制备单链模板以用于双脱氧测序
备择方案 制备用于双脱氧测序的双链 产物
备择方案 用噬菌体外切核酸酶消化双链 产物得到单链进行双脱氧测序
基本方案 用于化学测序的 产物的标记
备择方案 产物的基因组测序
用于基因组测序及足迹分析的连接介导
基本方案连接介导的单侧
辅助方案 从单层细胞制备用于 足迹分析的基因组
辅助方案 从悬浮细胞中制备用于 足迹分析的基因组
辅助方案 用于化学测序的基因组 的制备
产物的分子克隆
基本方案产生 凸出端
备择方案产生半位点
扩增 （）
基本方案在 适条件下进行 的 扩增
备择方案 避 长时间的共沉淀及复性步骤的方法
备择方案 将 直接用于扩增步骤
辅助方案粗制 的快速提取
利用单侧 （锚式） 进行 扩增
基本方案 扩增己知序列的下游（端）区段
基本方案 扩增己知序列上带（ 端）区段
通过 方法对微量 进行定量分析
基本方案
第章 蛋白质的表达
蛋白质在大肠杆菌中的表达概述
噬菌体 聚舍酶启动子表达系统
基本方案用双质粒系统进行表达
备择方案 质粒编码蛋白的选择性标记
备择方案 通过 噬菌体 感染的表达
融合蛋白载体表达概述
融合蛋白的酶解和化学裂解
基本方案 用 困子进行融合蛋白的酶解
辅助方案用 因子进行变性融合蛋白的裂解
备择方案 用凝血酶进行融合蛋白的酶解
备择方案 与分离介质结合的 融合蛋白的酶解
备择方案 用肠激酶进行融合蛋白的酶解
基本方案 用澳化氧对融合蛋白进行化学降解
备择方案 用提脏化学裂解融合蛋白
备择方案 低 水解融合蛋白进行化学裂解
谷脏甘肤转移酶融合蛋白的表达及 化
基本方案 谷脱甘肽转移酶融合蛋白的表达及 化
硫氧还蛋白融合蛋白的表达和 化
基本方案硫氧还蛋白融合蛋白的构建和表达
辅助方案 用弗氏细胞压碎器裂解大肠杆菌
辅助方案 硫氧还蛋白融合蛋白的渗透性释放
辅助方案 用热处理 化硫氧还蛋白
杆状病毒表达系统的概述
杆状病毒表达系统
昆虫细胞中蛋白质的翻译后修饰
用杆状病毒表达系统 量表达蛋白质的步骤
选择杆状病毒转移载体
昆虫细胞培养的 存及重组杆状病毒的产生
基本方案 昆虫细胞的 存和培养
基本方案 用线性化杆状病毒 共转染昆虫细胞
备择方案用野生型杆状病毒 共转染产生重组病毒
基本方案 杆状病毒储液的制备
基本方案 用噬斑试验测定病毒储液的滴皮
用杆状病毒系统表达和 化重组蛋白
基本方案 用于 初分析的小规模表达
辅助方案 蛋白质生产高峰期的确定
辅助方案 重组蛋白的代谢标记
基本方案 重组蛋白的大规模生产
基本方案 含有多聚组氨酸标签重组蛋白的 化
备择方案含有 标签重组蛋白的 化
概述：蛋白质在哺乳动物细胞中表达
病毒介导的基因转移
瞬时表达
用 细胞瞬时表达蛋白质
基本方案
症苗病毒表达系统概述
细胞系和症苗病毒储液的制备
基本方案 贴壁细胞的培养
基本方案 悬浮细胞的培养
基本方案 症苗病毒储液的制备
辅助方案 噬斑分析测定症苗病毒储液的滴度
基本方案 鸡胚成纤维细胞的制备
基本方案 病毒储液的制备
辅助方案 用 疫染 法滴定 病毒
重组症苗病毒的制备
基本方案 症苗载体转染（瘟苗病毒）感染的细胞
辅助方案 症苗病毒的 化
辅助方案 症苗病毒 的提取
基本方案 筛选重组病毒噬斑
基本方案 噬斑扩增
基本方案 重组 的活体 疫染
辅助方案 用刀豆蛋白 被组织培养板
重组症苗病毒及其产物的鉴定
基本方案 应用 方法检测症苗
基本方案 应用 杂交检测症苗病毒
基本方案 应用斑点杂交检测症苗病毒
备择方案应用点印迹检测表达的蛋自质
基本方案 应用 疫印迹检测表达蛋自
基本方案 应用 疫沉淀栓测表达蛋白
用症苗病毒 聚合酶系统表达基因
基本方案 重组症菌病毒（） 感染后的脂质体转染
基本方案 两种重组瘟苗病毒共感染细胞
基本方案 单病毒感染 细胞
基本方案 利用 系统进行基因表达
辅助方案脉冲标记检测表达的蛋白质
自主调节的 环素控制系统诱导基因表达
基本方案磷酸钙介导的 稳定转染 细胞和 环素调控的靶质粒
辅助方案分析目的基因的蛋白质表达
从哺乳动物细胞中表达和 化抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体
基本方案 从组成型表达 标记蛋白的克隆化细胞系中 化多亚基蛋白复合物
基本方案 从条件性表达 标记蛋白的克隆化细胞系中 化多亚基蛋白复合体
备择方案变化起始材料和挽脱条件 化抗原表位标记蛋自复合体的多种形式
辅助方案用 离子交换层析柱 化多种形式的抗原表位标记的蛋白复合体
第章 蛋白质磷酸化的分析
蛋白质磷酸化概述
目标记培养细胞和制备用于 疫沉淀的细胞裂解物
基本方案培养细胞的 标记和温和去垢剂裂解法
备择方案 煮沸法裂解细胞
磷酸氨基酸分析
基本方案磷酸氨基酸的酸水解和双向电旅分析
备择方案碱处理提高转移 滤膜上的含磷酸酶氨酸和磷酸苏氨酸的蛋白质的检测灵敏度
分析非标记蛋白质的磷酸化作用
基本方案 用抗磷酸醋氨酸抗体和标记蛋白 进行 疫印迹分析
备择方案用增强化学发光法（） 检测结合的抗体
基本方案 磷酸酶消化法鉴定磷酸化的蛋白质
酶法检测磷酸化作用
基本方案 用非 异酸性磷酸酶 化磷酸蛋白质
备择方案 用非 异碱性磷酸酶捕化磷酸蛋白质
基本方案 用丝氨酸苏氨酸蛋白磷酸酶消化磷酸蛋白质
备择方案 用酶氨酸磷酸酶消化磷酸蛋白质
辅助方案离解 的测量和鉴定
异性识别酷氨酸磷酸化肤的抗体的制备
基本方案 抗磷酸肤的多克隆抗体的制备
基本方案 抗磷酸肤的单克隆抗体的制备
辅助方案 肤的合成
辅助方案 将肤链交联到 和介质上
辅助方案 将磷酸酶氨酸交联到 和介质上
用外源性底物分析蛋白激酶
基本方案 环核苷酸依赖性蛋白激酶的分析
基本方案 蛋白 酶 异构体的分析
基本方案 用酶蛋白进行酷蛋白 酶的分析
备择方案用多肤底物进行酷蛋白激酶的分析
基本方案 钙调蛋白依赖性激酶的分析
基本方案 醋氨酸 酶的分析
基本方案 在凝肢中直接进行激酶的分析
辅助方案 用于激酶分析的细胞裂解方案
辅助方案 三氯乙酸沉淀法测定放射性物质的掺入率
辅助方案 磷酸纤维素膜的吸附
研究蛋白质磷酸化的渗透策略
基本方案用渗透细胞进行蛋白磷酸化的分析
备择方案 用于 的天然细胞样品制备
备择方案 制备用于等电聚焦的夭然细胞样品
磷酸肤图谱和磷酸化位点的鉴定
基本方案 用聚丙烯酷股凝肢分离的蛋白质的膜蛋白酶磷酸肤图谱
备择方案固相化蛋白质的水解消化
辅助方案 从纤维素 板上提取磷酸肤
基本方案 用于工 降解法测定肤中磷酸化氨基酸的位置
基本方案 第二次鉴别性捎化以检测磷酸肤中 定氨基酸的存在
辅助方案 用于微序列测定或质谱的磷酸肤的制备
第章 生物信息学
用 程序组进行序列相似性搜索
概述
搜索策略
第 章蛋白质相互作用的分析
利用相互作用阱双杂交系统鉴定相互作用蛋白
基本方案 鉴定诱饵蛋白
基本方案 相互作用蛋白的捕获
备择方案 相互作用阱的快速筛选
备择方案 通过相互作用交配进行捕获实验
辅助方案 用于 疫印迹分析的蛋白质提取物的制备
辅助方案 制备蛙 载体
与 融合蛋白结合的蛋白质的 和 化
基本方案 融合蛋自的 和 化
辅助方案提取物的制备
基于噬菌体表达克隆来确认相互作用蛋白质
基本方案相互作用克隆
表面等离子共振技术
基本方案 使用 芯片的表面等离子共振
基本方案 使用 芯片的表面等离子共振
用共沉淀法检测蛋白质 蛋白质之间的相互作用
基本方案用蛋白琼脂糖共沉淀蛋白
备择方案用 融合蛋白共沉淀
用 分析识别蛋白质相互作用
基本方案用 分析蛋白质混合物
备择方案 用 疫印迹技术检测相互作用蛋白质
备择方案 在 中用多肤检测 定的相互作用序列
第章 染 质的装配与分析
微球菌核酸酶分析染 质结构
基本方案 渗透化细胞的染 质的徽球菌核酸酶消化
基本方案 分离的细胞核的染 质的微球菌核酸酶消化
基本方案 化的基因组 的微球菌核酸酶消化
辅助方案 染 质消化得到的 的 化和鉴定
辅助方案 核酸酶切割图谱分析策略
辅助方案 使用 的 方法在核苷酸水 上检测 对双链的切割
分离乙酸尿素聚丙烯酷胶凝胶电泳分离组蛋白变体和翻译后修饰异构体
基本方案组蛋白的乙酸尿素聚丙烯酣睡凝肢电泳分析
辅助方案 凝肢板的组装
辅助方案 从制备的核中分离组蛋白
辅助方案 聚丙烯酣睡凝脏的电转移
用 疫共沉淀的方法从总细胞抽提物中确定与染 质结合的蛋白质
基本方案用 疫共沉淀的方法从细胞总抽提物中确定与染 质结合的蛋白质
从哺乳动物细胞中分离组蛋白和核小体核
基本方案 核的制备
基本方案 去 的寡聚刷、体的溶解和 化
基本方案 单聚及二聚核小体的 化
基本方案 握磷灰石层析法 化核 组蛋白
用盐透析的方法组装核小体模板
基本方案 用逐步盐透析的方法组装核小体模板
基本方案 用梯度盐透析的方法组装高浓度的单核小体
基本方案 用梯庭盐透析的方法组装核小体串
辅助方案 细菌的重组核 组蛋白的 化
辅助方案 用于单核小体组装的单链端标记的 的制备
辅助方案 用于组装高浓度非标记的单核小体的 的制备
辅助方案 用于核小体串组装的 的制备
辅助方案 用琼脂糖凝肢电掠分析重建复合体
辅助方案 用聚丙烯酿腊凝肢电泳分析重建复合体
辅助方案 通过 消化确定核小体串组装的革围
使用果蝇系统进行染 质重组
基本方案 果蝇 染 质重组抽提物的制备
基本方案 从果蝇胚胎中 化核 组蛋白
基本方案 用 抽提物进行染 质重组
基本方案 重组的果蝇 的表达和 化
基本方案 重组的果蝇 的表达和 化
备择方案 重组的果蝇 的表达和 化（ 树脂）
基本方案 使用重组的果蝇因子进行染 质装配
备择方案 重组染 质装配反应中的核 组蛋白与 比率的滴定
辅助方案果蝇拓扑异构酶 的核 催化区域的表达和 化
第章 核酸阵列
核酸阵列概述
微阵列擅长做什么？
核酸阵列还能够做什么？
关于数据分析
哪里有更多的信息？
用于表达分析的 的制备
策略安排
基本方案用于表达监测以及与寡核苦酸芯片杂交的 扩增
辅助方案 对照基因的体外转录和转录库的制备
备择方案 和体外转录产物的回相可逆固定（） 化
辅助方案 定量
用 阵列技术检测人的基因表达谱
基本方案 扩增和影印
基本方案 抽提和标记
基本方案 杂交和数据处理
辅助方案 的琼脂糖凝肢电泳
辅助方案 荧光法测定 浓度
辅助方案 多聚赖氨酸封闭玻片
第章 组合文库的建立和使用
构建组合库及文库所用的 库的设计、合成和扩增
基本方案 随机序列库的 化
辅助方案 库的复杂度的测定
辅助方案 库的偏好性的测定
辅助方案 库扩增的小规模 反应的 化
基本方案 库 的大规模扩增
肤适配体 用于细胞过程的正向及反向分析的显性遗传学试剂
基本方案 构建硫氧还蛋白肤适配体组合库
基本方案 利用双杂交系统相互作用阱筛选 定蛋白的肤适配体
基本方案 通过相互作用交配确定识别 异性
基本方案 肤适配体的 和力成熟
基本方案 用肤适配体正向分析细胞过程
辅助方案肤适配体靶点的鉴定
利用 显示法进行蛋白筛选
基本方案 制备和 化 显示蛋白
基本方案 显示蛋白的 化和逆转录
基本方案 显示蛋白的筛选与扩增
辅助方案 标签的 化
辅助方案 诱导突变
第章 单个细胞或 细胞间差异表达基因的发现和分析
差减 文库的建立
基本方案差减 文库的构建
基于 的差减 克隆
基本方案差躏 文库的构建
辅助方案狭锺斑点杂交监测差减过程
的 差异显示
基本方案 的 差异显示
限制性内切核酸酶介导的差异显示（）
基本方案 文库的准备和两轮扩增
备择方案两 段 扩增
辅助方案直接印迹电泳
基于 的转录表达谱分析
基本方案基于 的转录表达谱分析
基因表达系列分析（）
基本方案基因表达系列分析（）
辅助方案 验证 产物
辅助方案 化双标签的 扩增
附录 试剂和溶渡
附录 实用测量值和数据
附录 生物化学和分子生物学常用技术
附录 凝胶和印迹实验中放射性标记蛋白和 的检测及定量
附录 玻璃器皿的硅化
附录 透析与 滤
附录 用吸收光谱法和荧光光谱法定量 和
附录 通过沉默突变引人限制性内切核酸酶识别位点
附录 哺乳动物细胞组织培养技术
附录 使用放射性同位素
附录 分子生物学家的统计学：组比较
附录 试剂和设备的 商
附录 参考文献
索引
| ISBN | 9787030203366 |
|---|---|
| 出版社 | 科学出版社有限责任公司 |
| 作者 | FM 奥斯伯 等主编金由辛 等译校 |
| 尺寸 | 16 |